產品咨詢: [email protected]
購買咨詢:
[email protected]

鄭州高新區長椿路11號大學科技園Y17號樓
電話:
037186033505
傳真:037186628932 

高效液相色譜法分類
發布時間:2013-01-15 瀏覽次數:5185次 來源:



高效液相色譜法分類


        高效液相色譜法是在經典液相色譜的基礎上發展起來的一種色譜方法,自20世紀60年代崛起,經過數十年的發展,在理論和實踐方面日趨完善,應用范圍已涉及醫藥、環保、生命科學、石油化工等幾乎所有基礎與應用領域。在按機理可以分為以下幾類:

1. 吸附色譜法( adso rption chromatography)

        以吸附劑為固定相的色譜方法稱為吸附色譜法。使用最多的吸附色譜固定相是硅膠, 流動相一般使用一種或多種有機溶劑的混合溶劑。在吸附色譜中, 不同的組分因受固定相吸附力的不同而被分離。組分的極性越大, 固定相的吸附力越強, 則保留時間越長。流動相的極性越大, 洗脫力越強, 則組分的保留時間越短。

2. 液-液分配色譜法( liquid-liquid chromatography)

      液-液分配色譜的固定相(覆蓋于填料表面的溶劑膜) 和流動相是互不相溶的兩種溶劑, 分離時, 組分溶入兩相中, 不同的組分因分配系數( K) 的不同而被分離。按照固定相和流動相極性的不同, 分配色譜法又可分為正相色譜法和反相色譜法兩類。

(1)正相色譜法( normal phase chromatography)

        固定相極性大于流動相極性的分配色譜法稱為正相色譜法。硅膠與氰基鍵合硅膠、氨基鍵合硅膠等極性的化學鍵合固定相是該法常用的固定相, 流動相一般為極性較小的有機溶劑。在正相色譜中, 極性小的組分由于K 值較小先流出, 極性較大的組分后流出。正相色譜法用于溶于有機溶劑的極性及中等極性的分子型物質的分離。

(2)反相色譜法( reversed phase chromatography)

        流動相極性大于固定相極性的分配色譜法稱為反相色譜法。反相色譜法使用非極性固定相,最常用的非極性固定相是十八烷基硅烷鍵合硅膠,還有辛烷基硅烷鍵合硅膠等,氰基柱與氨基柱也可用于反相色譜。流動相常用水與甲醇、乙腈或四氫呋喃的混合溶劑。在該法中極性大的組分因K值較小先流出色譜柱,極性較小的組分后流出。流動相中有機溶劑的比例增加,極性減小,洗脫力增強。反相色譜法是目前應用最廣泛的高效液相色譜法。

3. 離子交換色譜法( ion exchange chromatography ) 

        離子交換色譜法是以離子交換劑為固定相的色譜方法, 組分因和離子交換劑親和力的不同而被分離。柱填料含有極性可離子化的基團, 如羧酸、磺酸或季銨離子, 在合適的pH 值下, 這些基團將解離, 吸引相反電荷的物質。由于離子型物質能與柱填料發生不同程度的吸引- 解吸, 所以可被分離。

        樣品中不同的組分因離子交換平衡常數的不同而分離。離子交換色譜的流動相一般為一定pH 值的緩沖溶液, 有時也
加入少量的有機溶劑, 如乙醇、四氫呋喃、乙腈等, 以增大組分在流動相中的溶解度。流動相的pH 值影響離子交換劑的交換容量。對弱酸或弱堿性的被分離組分, 流動相的pH 值還會影響其電離狀況, 待分離組分必須處于離解狀態, 才能被分離。離子交換色譜法在藥物分析中的應用非常廣泛, 例如生物堿、磺胺類藥物、某些抗生素及維生素等的分析均可采用此方法。

4. 分子排阻色譜法( size exclusion chromatography)

        分子排阻色譜也稱為凝膠色譜。其固定相是具有一定孔徑范圍的多孔性物質, 即凝膠。被分離組分因分子空間尺寸大小的不同而被分離。當組分被流動相攜帶進入色譜柱時, 體積大的分子不能進入固定相表面的孔穴中, 而隨流動相直接通過色譜柱, 保留時間最短。體積小的分子可以進入孔穴內, 在色譜柱中所走的途徑較長, 保留時間也較長。分子的體積越小, 可進入的孔穴越多, 所走的路徑越長, 保留時間也越長。因此,凝膠色譜中, 在一定范圍內, 體積不同的分子保留時間不同,從而達到分離的目的。凝膠色譜法主要用來分離高分子化合物, 如蛋白質、多糖等。由于分子量和分子體積有關, 凝膠色譜還可以用來測定組分的分子量。

5. 親和色譜法( high performance a ffinity chromatography,HPAC)

        親和色譜法是利用或模擬生物分子之間的專一性作用, 從生物樣品中分離和分析一些特殊物質的色譜方法。該法的固定相是將配基連接于適宜的載體上而制成的, 利用樣品中各種物質與配基親和力的不同而達到分離。當樣品溶液通過色譜柱時, 待分離物質X與配基L形成X- L復合物, 而被結合在固定相上, 其他物質由于與配基無親和力而直接流出色譜柱, 用適宜的流動相將結合的待分離物質洗脫, 如采用一定濃度的醋酸或氨溶液為流動相, 減小待分離物質與配基的親和力, 使復合物離解, 從而洗脫下來。HPAC 可用于生物活性物質的分離、純化和測定, 還可以用來研究生物體內分子間的相互作用及其機理等。

6. 手性色譜法( chira l chromatography )

        許多有機藥物的分子結構中有不對稱碳原子, 又稱手性碳原子, 有手性碳原子的藥物具有旋光性。立體構型不同的對映體, 其藥效、毒副作用往往不相同。例如氯霉素( 含有二個手性碳原子), 只有D-(-)異構體有效, 而L-(+)異構體完全無效。因此, 對映體的分離, 在藥物的制備和質量控制方面, 具有重要的意義。對映體在普通條件下的理化性質相同, 因此分離對映體需要在手性拆分條件下進行。分離對映體的色譜方法稱為手性色譜法。


英諾生物 高效液相色譜柱



版權所有 鄭州英諾生物科技有限公司 豫ICP備07013496號 電話:0371-86033505 86073965 傳真:0371-86628932
地址:鄭州高新區長椿路11號大學科技園研發樓Y17號 E-mail: [email protected] 

豫公網安備 41019702002235號



http://exmail.qq.com/zh_CN/htmledition/js_biz/outerlogin.js"  charset="gb18030">

http://exmail.qq.com/zh_CN/htmledition/js_biz/outerlogin.js"  charset="gb18030">

writeLoginPanel({domainlist:"innosepbio.com", mode:"vertical"});
分分彩买两种稳赚